dan antibodi poliklonal ini mengenali IBD
, KSE, KSE indonesia , komunitas satwa eksotik , komunitas
satwa eksotik indonesia
+
+
+
+
+
KSE/komunitas satwa eksotik indonesia adalah komunitas
berbasis teknologi kini yaitu digital teknologi dengan memanfaatkan medsos
umumnya dan WA/whatsapp sebagai media pemersatu antar anggota sebuah regional,
perwakilan kota dengan KSE Pusat, dan semua regional dengan KSE pusat.
Sebagai komunitas kekinian dengan “ mengatasi jarak dan keberagaman “ , dimana mengatasi
jarak sudah dibahas diatas, maka tentang keberagaman ini dalam arti apapun
PET/PELIHARAAN anda, bahkan TANPA PET/PELIHARAAN,punya niat gabung, maka
dimanapun anda maka GRUP-GRUP WA terdekat kami siap menerima anda sebagai
bagian keluarga KAMI, KSE INDONESIA
Gabung : 085805368593/08995557626/081275333440
Gabung : 085805368593/08995557626/081275333440
Gabung : 085805368593/08995557626/081275333440
Gabung : 085805368593/08995557626/081275333440
Gabung : 085805368593/08995557626/081275333440
Gabung : 085805368593/08995557626/081275333440
Gabung : 085805368593/08995557626/081275333440
Gabung : 085805368593/08995557626/081275333440
Gabung : 085805368593/08995557626/081275333440
Gabung : 085805368593/08995557626/081275333440
Gabung : 085805368593/08995557626/081275333440
Undang untuk pameran/edukasi :
085805368593/08995557626/081275333440
Undang untuk pameran/edukasi :
085805368593/08995557626/081275333440
Undang untuk pameran/edukasi :
085805368593/08995557626/081275333440
Undang untuk pameran/edukasi :
085805368593/08995557626/081275333440
Undang untuk pameran/edukasi : 085805368593/08995557626/081275333440
Undang untuk pameran/edukasi :
085805368593/08995557626/081275333440
.
.
.
.
Abstrak
Penyakit tubuh inklusi (IBD) adalah penyakit di seluruh
dunia di captive boa constrictors (boa constrictor) dan kadang-kadang pada ular
lain dari keluarga Boidae dan Pythonidae. Agen penyebab yang tepat dan
patogenesis belum sepenuhnya dipahami. Saat ini, diagnosis IBD didasarkan pada
identifikasi mikroskopis cahaya dari badan inklusi intracytoplasmic eosinofilik
dalam hematoxylin dan jaringan bernoda eosin atau apusan darah/blood smear.
Protein 68 KDa yang unik secara antigen diidentifikasi dalam
badan inklusi IBD, yang disebut protein IBD. Tes diagnostik antemortem berbasis
imun yang valid diperlukan untuk menyaring ular yang berisiko mengalami IBD.
Dalam studi ini, meskipun kesulitan dalam melarutkan badan inklusi untuk semi-dimurnikan,
memanfaatkan teknologi hybridoma, antibodi protein monoklonal tikus (MAB)
anti-IBD yang diproduksi. Spesifisitas antigenik dari antibodi dikonfirmasi dan
divalidasi oleh western blots, uji imunosorben terkait-enzim, mikroskop
elektron transmisi-immuno, dan pewarnaan imunohistokimia.
Jaringan parafin yang
melekat pada konstriksi boa positif dan negatif IBD (n = 94) yang dikumpulkan
dari tahun 1990 hingga 2011 diuji dengan pewarnaan imunohistokimia. Dalam boa
constrictors, MAB anti-IBDP memiliki sensitivitas 83% dan spesifisitas 100%
dalam mendeteksi IBD. Antibodi tersebut juga bereaksi silang dengan badan
inklusi IBD dalam ular sanca karpet (Morelia spilota) dan ball python (python
regius). Antibodi yang divalidasi ini dapat berfungsi sebagai alat untuk
pengembangan tes imunodiagnostik ante-mortem untuk IBD.
Citation: Chang L-W, Fu A, Wozniak E, Chow M, Duke DG, et
al. (2013) Immunohistochemical Detection of a Unique Protein within Cells of
Snakes Having Inclusion Body Disease, a World-Wide Disease Seen in Members of
the Families Boidae and Pythonidae. PLoS ONE 8(12): e82916. doi:10.1371/
journal.pone.0082916 Editor: Justin David Brown, University of Georgia, United
States of America Received June 27, 2013; Accepted October 28, 2013; Published
December 10, 2013 Copyright: © 2013 Chang et al. This is an open-access article
distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License, which
permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium,
provided the original author and source are credited. Funding: The validation
of the monoclonal mouse anti-IBDP antibody was funded by Morris Animal
Foundation (www.MorrisAnimalFoundation.org) under project “Diagnosing Inclusion
Body Disease (IBD), A Worldwide Infectious Disease of Boid Snakes” (Grant ID
D10ZO-045). The funders had no role in study design, data collection and
analysis, decision to publish, or preparation of the manuscript. Competing
interests: For this study blocks of tissues embedded in paraffin were provided
by Northwest ZooPath and Zoo/Exotic Pathology Services. These blocks were cut
for histological staining and were then returned to the providers. This does
not alter the authors' adherence to all the PLOS ONE policies on sharing data
and materials.
* E-mail: jacobsone@ufl.edu
pengantar
Inklusi Tubuh Penyakit (IBD) adalah penyakit di seluruh
dunia yang unik dan berbahaya yang biasanya terlihat pada anggota ular yang
ditangkap di keluarga Boidae dan Pythonidae [1]. Penyakit ini paling sering
dilaporkan di boa constrictors (Boa constrictor) dan kadang-kadang pada ular
terkait lainnya [1-14] yang merupakan standar emas/gold standart saat ini untuk mendiagnosis IBD [1,12]. Badan
inklusi yang terlihat pada IBD kadang-kadang bisa sulit dibedakan dari bahan
proteinaceus seluler lain atau granula seluler yang dapat terakumulasi dalam
sitoplasma sel yang terpengaruh [1].
Dalam beberapa kasus, badan inklusi mungkin tidak berlimpah
di jaringan visceral, atau perkembangan awal badan inklusi yang lebih kecil
mungkin diabaikan dalam bagian yang diwarnai H&E. Diperlukan uji diagnostik
molekuler yang lebih sensitif dan spesifik. Pewarnaan imunohistokimia (IHC)
adalah metode yang direkomendasikan dengan sensitivitas dan spesifisitas tinggi
untuk mendiagnosis penyakit menular dan tidak menular [15]. Dengan pewarnaan
IHC, antibodi bereaksi terhadap antigen spesifik dapat digunakan untuk
melokalisasi antigen dalam jaringan yang terkena, yang meningkatkan akurasi
diagnosis [15]. Protein yang berbeda secara antigen diidentifikasi dalam
karakteristik badan inklusi intracytoplasmic dari konstriktor boa [10].
Protein ini sekitar 68 KDa dalam berat molekul, dan dinamai
"protein penyakit tubuh inklusi" (IBDP) [10]. Antibodi monoklonal
(MAB) yang diproduksi melawan IBDP bereaksi terhadap badan inklusi dalam bagian
jaringan beku menggunakan pewarnaan IHC. Sayangnya, antibodi tidak bereaksi
terhadap tubuh inklusi dalam jaringan yang tertanam parafin, dan beberapa tahun
kemudian klon hibridoma asli hilang (Wozniak, komunikasi pribadi).
Baru-baru ini, antibodi poliklonal diproduksi terhadap
nukleoprotein yang diprediksi dari virus mirip arena dan virus mirip seluruh
arena yang terisolasi, dan antibodi poliklonal ini mengenali badan inklusi IBD
[8,14]. Namun, sensitivitas dan spesifisitas antibodi poliklonal dapat
bervariasi dari batch ke batch, dan antibodi ini belum divalidasi untuk
digunakan dalam diagnosis klinis. Antibodi yang mengenali IBDP dapat berfungsi
sebagai alat yang kuat untuk mendiagnosis IBD menggunakan pewarnaan IHC, dan
dapat digunakan untuk mengembangkan tes diagnostik berbasis imun lain untuk
IBD. Untuk pewarnaan IHC dalam kedokteran hewan, ada kekurangan antibodi
berkualitas tinggi yang dibuat untuk mengidentifikasi antigen spesifik di
antara spesies yang berbeda [15].
Masalah ini bisa lebih signifikan untuk mendiagnosis
penyakit dalam pengobatan hewan zoologi dan eksotis di mana spesies yang lebih
beragam terlihat. Lebih lanjut, tampaknya ada kekurangan standardisasi dalam
metodologi pewarnaan IHC di antara berbagai laboratorium veteriner [15]. Tujuan
standardisasi dalam pewarnaan IHC adalah untuk mencapai hasil yang dapat
direproduksi dan konsisten di dalam dan di antara laboratorium yang berbeda.
Oleh karena itu, MAB perlu divalidasi dengan benar sebelum digunakan atau
ditawarkan sebagai reagen diagnostik. Dalam penelitian ini, kami
mempresentasikan metode yang dimodifikasi untuk mengisolasi badan inklusi IBD
dari homogenat jaringan mentah.
MAB anti IBDP diproduksi terhadap badan inklusi IBD
semi-murni yang diisolasi dari boa constrictor, dan reaktivitasnya dikonfirmasi
oleh western blots, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), mikroskop
elektron immuno-transmission (immuno-TEM), dan Pewarnaan IHC pada jaringan yang
tertanam parafin. Berdasarkan pedoman yang disarankan oleh Ramos-Vara et al.
[15], kami pertama-tama menentukan kondisi standar untuk pewarnaan IHC
menggunakan MAB anti-IBDP. Selanjutnya, kami memvalidasi kinerja MAB dengan
mengevaluasi faktor-faktor yang dapat mempengaruhi pewarnaan IHC, yang termasuk
waktu fiksasi dalam formalin dan waktu penyimpanan dalam parafin. Selanjutnya,Meskipun
beberapa retrovirus [2,9-11,13]
, dan yang lebih baru, arena-like virus telah diidentifikasi
pada ular dengan IBD [8,13,14], studi transmisi yang menggunakan virus yang
dimurnikan pada ular hidup akan diperlukan untuk membangun suatu hubungan
sebab-akibat. Penyakit tubuh inklusi ditandai dengan pengamatan badan inklusi
intracytoplasmic eosinofilik dalam hematoxylin dan eosin (H&E) yang
diwarnai dengan slide histologis atau apusan darah,
reaktivitas silang MAB ini diproduksi untuk digunakan dalam
boa constrictors diuji untuk kemanjurannya dalam bereaksi dengan badan inklusi
dari spesies ular lain yang memiliki IBD, dan penyakit inklusi lainnya yang
membentuk tubuh pada ular yang tampak mirip dengan IBD. Akhirnya, kinerja
diagnostik uji IHC menggunakan anti IBDP MAB ditentukan.
Material dan metode
Pernyataan Etika Pengumpulan sampel jaringan tetap segar dan
formalin, eutanasia ular, dan produksi antibodi monoklonal disahkan di bawah
Protokol Komite Perawatan Hewan dan Penggunaan Lembaga Kelembagaan Universitas
Florida 201101156.
Koleksi Sampel
Sebanyak 112 ular digunakan dalam penelitian ini,
termasuk 94 boa constrictors, 4 boa pohon annulated (Corallus annulatus), 4
ular ball piton (Python regius), 2 ular
sanca karpet (Morelia spilota), 2 ular jagung/corn snake (Pantherophis guttatus), 1 boa pohon zamrud
(Corallus caninus), 4 boa pelangi (Epicrates cenchria), dan 1 viper palem
(Bothriechis marchi) (Tabel 1).
Jaringan tertanam parafin dari 99 ular dikumpulkan dari
repositori Layanan Patologi Anatomi dan Laboratorium Pengujian Penyakit Infeksi
Zoologi, Sekolah Tinggi Kedokteran Hewan, Universitas Florida (UF)
(Gainesville, FL, USA), dan blok tambahan disediakan oleh Northwest. ZooPath
(Monroe, WA, USA) dan Zoo / Exotic Pathology Services (Sacramento Barat, CA,
USA). Sampel jaringan tetap segar atau formalin dari 13 konstriktor boa
dikumpulkan sepanjang 2008 hingga 2011 oleh dokter hewan dalam praktik swasta
atau Rumah Sakit Hewan UF, dan dipindahkan ke Laboratorium Pengujian Penyakit
Penyakit Zoologi, Fakultas Kedokteran Hewan, UF untuk diagnosis IBD.
Bagian-bagian jaringan segar difiksasi untuk diproses menjadi blok parafin dan
pelabelan immuno-TEM, dan sisa bahan biologis disimpan dalam ultra freezer pada
-80 ° C. Laporan patologi tersedia untuk setiap kasus dengan diagnosis akhir
diverifikasi oleh ahli patologi bersertifikat dewan berdasarkan pemeriksaan
histologis dari bagian pewarnaan H&E.
Untuk setiap kasus, satu blok dengan jaringan standar (hati,
ginjal, atau pankreas) dipilih untuk pewarnaan IHC. Jika badan inklusi IBD
tidak dijelaskan dalam jaringan standar, blok tambahan dengan jaringan yang
memiliki tubuh inklusi IBD diwarnai dengan IHC.
Selanjutnya dan lengkap di :
